کلونینگ و شناسایی ژنgra۴ توکسوپلاسما گونده ای سویه rh در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcdna۳

Authors

فاطمه غفاری فر

fatemeh ghafarifar tarbiat modares universityتربیت مدرس ناهید ماسبی

nahid masebi زهره شریفی

zohreh sharifi عبدالحسین دلیمی اصل

abdolhosein dalimiasl tarbiat modares universityدانشگاه تربیت مدرس حسین وزینی قیصر

abstract

مقدمه و هدف: توکسوپلاسموزیس به وسیله یک انگل تک یاخته داخل سلولی (توکسوپلاسما گونده ای) ایجاد می شود و در سراسر جهان گسترش دارد. این بیماری دارای اهمیت عمده پزشکی و دامپزشکی است و عامل بیماری مادرزادی در انسان و حیوانات اهلی است. علاوه بر این، به تازگی به دلیل آنسفالیت در افراد ایدزی به اهمیت آن افزوده شده است. به همین دلیل تهیه یک واکسن مؤثر علیه توکسوپلاسما یک هدف مهم در جهان است. آنتی ژن گرانولی 4 (gra4) به عنوان یک آنتی ژن عمده توکسوپلاسما گونده ای شناخته شده است. از این رو، به عنوان یک کاندیدا برای تهیه واکسن ملاحظه شده است. آنتی ژن گرانولی 4 از برادی زوئیت ها و تاکی زوئیت ها ترشح می شود. این ژن به صورت کپی تک و فاقد اینترون است. هدف از این تحقیق، تهیه پلاسمید نوترکیب حاوی ژن gra4 است که بتوان از آن به عنوان dna واکسن استفاده کرد. مواد و روش کار: در این تحقیق ژن gra4 پس از تکثیر به روش pcr در پلاسمید ptz57r کلون شد. سپس در باکتری اشرشیاکلی سوش tg1 ترانسفورم شد. پلاسمید نوترکیب پس از تکثیر از باکتری میزبان استخراج و ژن هدف با استفاده از برش آنزیمی، با آنزیم های kpni و ecori از پلاسمید ptz57rجدا شد. از طرف دیگر پلاسمید pcdna3 برای پذیرش قطعه gra4 و انجام کلونینگ نیز با آنزیم های kpni و ecori برش داده شد. gra4 درون پلاسمید pcdna3 ساب کلون شد و این محصول واکنش اتصال در باکتری های فوق ترانسفورم شده و در محیط lb حاوی آمپی سیلین کشت داده شدند؛ پلاسمیدهای نوترکیب pcgra4 به وسیله کیت استخراج پلاسمید، از اشرشیاکلی تخلیص شدند. نتایج: صحت کار با روش های pcr و برش آنزیمی به کمک آنزیم های اختصاصی فوق با استفاده از الکتروفورز تأیید شده و نتایج نشان داد، قطعه gra4 در پلاسمید pcdna3 کلون شده است و باند حدود 1058 جفت بازروی ژل آگاروز ایجاد شده بود که هم اندازه ژن gra4 توکسوپلاسما گونده ای است و تأیید نهایی با استفاده از توالی یابی انجام شد. نتیجه گیری: نتایج حاصل نشان داد، کلونینگ و ترانسفورم قطعه gra4 در پلاسمید pcdna3 با موفقیت انجام شده است.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

شناسایی و بیان ژنgra۷ توکسوپلاسما گونده ای سویه rh در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcdna۳

سابقه و هدف: توکسوپلاسموزیس از بیماری های شایع جهان است و بیشتر به علت عوارض وخیمی که در موارد مادرزادی و بیماران مبتلا به ایدز ایجاد می کند، اهمیت دارد. یکی از راه های پیشگیری از این انگل در انسان و دام استفاده از واکسن می باشد. آنتی ژن گرانولی 7 (gra7) یک آنتی ژن فشرده ترشحی 29 کیلودالتونی توکسوپلاسما گونده ای می باشد که در واکوئل پارازیتوفروس تولید شده، توسط سلول های آلوده میزبان آزاد می شود...

full text

کلونینگ و شناسایی ژنGRA4 توکسوپلاسما گونده‌ای سویه RH در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcDNA3

  Background and Objective: Toxoplasmosis, caused by an intracellular protozoan parasite, Toxoplasma gondii, is widespread throughout the world. Being a cause of congenital disease and abortion in humans and in domestic animals, the disease is of major medical and veterinary importance. In addition, it has increased importance due to toxoplasma encephalitis in AIDS patients. Therefore, developi...

full text

کلونینگ ژن GRA5 توکسوپلاسما گوند‌ای سویه RH در پلاسمید یوکاریوت

مقدمه: توکسوپلاسموز یکی از بیماری‌ های زئونوز و دارای انتشار وسیع در جهان بوده که اثرات شدید بـالینی و دام پزشکی عدیده ای را ایجاد می‌کند. این انگل داخل سلولی باعث عوارض عصبی و بیماری ‌های چشمی در افراد دارای ضعف ایمنی و نوزادان متولد از مادران آلوده می شود. بروز موارد زیاد بیماری همراه با عوارض شدید و کشنده توکسوپلاسموز ضرورت یافتن واکسن مؤثری برای این بیماری را نشان می دهد. یکی از مهم ‌ترین ر...

full text

شناسایی و بیان ژنGRA7 توکسوپلاسما گونده‌ای سویه RH در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcDNA3

سابقه و هدف: توکسوپلاسموزیس از بیماری‌های شایع جهان است و بیشتر به علت عوارض وخیمی که در موارد مادرزادی و بیماران مبتلا به ایدز ایجاد می کند، اهمیت دارد. یکی از راه های پیشگیری از این انگل در انسان و دام استفاده از واکسن می باشد. آنتی‌ژن ‌گرانولی 7 (GRA7) یک آنتی ژن فشرده ترشحی 29 کیلودالتونی توکسوپلاسما گونده ای می باشد که در واکوئل پارازیتوفروس تولید شده، توسط سلول های آلوده میزبان آزاد می شو...

full text

کلونینگ ژن gra۵ توکسوپلاسما گوند ای سویه rh در پلاسمید یوکاریوت

مقدمه: توکسوپلاسموز یکی از بیماری های زئونوز و دارای انتشار وسیع در جهان بوده که اثرات شدید بـالینی و دام پزشکی عدیده ای را ایجاد می کند. این انگل داخل سلولی باعث عوارض عصبی و بیماری های چشمی در افراد دارای ضعف ایمنی و نوزادان متولد از مادران آلوده می شود. بروز موارد زیاد بیماری همراه با عوارض شدید و کشنده توکسوپلاسموز ضرورت یافتن واکسن مؤثری برای این بیماری را نشان می دهد. یکی از مهم ترین راه ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
دانشور پزشکی

جلد ۱۷، شماره ۸۵، صفحات ۱-۸

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023